樹木の葉の水分生理学

齋藤 隆実  植物生態学研究室



落葉広葉樹の蒸散と葉の水分特性
研究をはじめた頃は地球規模の気候変動に興味がありました。 そのためには植物の生態について詳しく勉強をしたほうがよいと指導教官の森川先生に助言をいただきました。 そこで、森林総研の松本室長の下で、樹木の生理生態学の勉強をさせてもらうことになりました。

将来、地球温暖化によって森林の環境は大きく変化すると考えられます。 環境の変化によっていくつかの樹木の種は衰退し森林が荒廃するかもしれません。 よって、森林の姿がどのように変化するのかあらかじめ予測しておくことが大切です。 そのためには森林を構成する主な種の生理的な性質についてよく知っておく必要があります。

ある種の特徴を知るためには他の種と比較することが有効です。 そこで、これまでの研究結果をもとに比較が試みられてきました。 しかし、樹齢や生育地、測定方法などの条件が研究ごとに異なっており、 これらを単純に比較するだけでは種による違いを明確にすることはできませんでした。 そこで、同じ場所で育てた同じ齢の樹木について比較することになりました。

山梨県森林総研の田中さんが多種類の落葉広葉樹を苗畑で育てていました。 その中からミズメ、クリ、ミズキ、コブシ、ホオノキ、ミズナラ、コナラ、ケヤキを利用しました。 いずれも日本の冷温帯落葉広葉樹林でよく見られる樹木です。 高さ約6mに育った6年生の樹木をとりまくように足場を組み、樹冠上部の葉を測定できるようにしました。 真夏の数日間に一日を通して光合成速度や蒸散速度などの葉の生理的活性を同時に測定しました

その結果、葉の生理的活性は一日の間に大きく変化し、 とくに蒸散速度の最大値は種によって大きく違っていました(図1-1)。 そこで、どのようなしくみで最大の蒸散速度に違いが生まれるのか解析しました。 蒸散速度(E)は土壌から葉までの水分通導度(Ksoil-leaf)と、 土壌と葉との水ポテンシャルの差(Ψsoil - Ψleaf)とによって決まります(Ishida et al. 1992)。

E = Ksoil-leaf × (Ψsoil - Ψleaf)

解析の結果、水分通導度は種間で有意な差がありませんでした。 一方で、水ポテンシャル差は種によって有意に異なり、 最大の蒸散速度が大きい種ほど大きい傾向がありました。 さらに、山梨県環境研の中野さんの実験室をお借りし、葉のPV曲線(脱水曲線)を測定しました。 この曲線から葉の水ポテンシャルがどのくらい低下したときに、細胞の膨圧が失われるのか(しおれ点;Ψtlp)評価することができます。 その結果、日中の水ポテンシャルの差が大きい種ほど、しおれ点が低いことがわかりました(図1-2)。



したがって、日中に最大の蒸散速度の大きい種は、葉と土壌の間の水ポテンシャルの差が大きく、 それは、葉の水ポテンシャルが低下しても膨圧を維持できるからだということがわかりました。 この研究の結果は、葉の水分特性が樹木全体の水分の輸送に大きく影響することを示しています。 そこで、葉の水分特性についてさらに調べることにしました。

葉の水分に関する性質については、とりわけ葉の細胞の膨圧を保つしくみが重要です。 膨圧を失うと、代謝などの細胞の生理的活性に障害が現れるからです。 乾燥した環境では膨圧が失われやすいので、葉の吸水能力が向上することによって膨圧維持能力が高めれます。 葉の吸水能力は、細胞内に溶質が蓄積し、細胞内液の浸透ポテンシャルが低下することで向上します。 この細胞の働きを浸透調節といい、植物が受ける水ストレスとの関係が詳しく調べられてきました。

一方で、細胞の膨圧維持を考えるときには、膨圧の落ち方も大事です。 すなわち、細胞が失った水分量に対して、どのくらい膨圧が低下するかということを考える必要があります。 しかし、これまでこの性質(体積弾性率)については十分に検討されてきませんでした。 そこで、大阪大学の寺島先生の下で体積弾性率について詳しく調べることにしました。

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水ストレスに対する葉の体積弾性率の応答
体積弾性率(ε;イプシロン)は葉細胞の体積(V)の相対変化に対する膨圧(P)の変化の割合です。数式では以下のように表されます。

ε = V(dP/dV)

εは葉が脱水したとき細胞の膨圧低下の程度を決める大事な値です。 しかし、水ストレスに対するεの応答については30年以上も結論が出ていませんでした。 それは、正反対の結果が報告され、どの結果もよく解釈されてきたからです。 たとえば、 値が上昇した結果(Ayob et al. 1992など)については、 細胞がわずかに水分を失っただけで膨圧が大きく下がり、葉の水ポテンシャルが下がる(細胞の吸水力が上がる)ので適応的と説明されました。 一方、値が低下した結果(Joly & Zaerr 1987など)については、 細胞が水分を大きく失っても膨圧が低下しにくいので適応的と解釈されました。 相反する応答がともに適応的という説明は矛盾しています。 そこで、過去の結果の整理をするとともに、水ストレスに対するεの応答を確かめ矛盾の解消を目指しました。

この研究では二つの実験を行い、異なる方法で葉に水ストレスを与えました。
@の結果、しおれ点(Ψtlp)は処理区では対照区より有意に低下し、 この低下はεの低下(図2-2)と浸透調節との両方の結果でした。 しおれ点の有意差はその後の潅水によって小さくなりました。 Aの結果、しおれ点は処理開始から15日後に処理枝で対照枝より有意な低下が見られました(図2-3)。 εも15日後に有意な低下が見られましたが、有意差はその後の降雨によって直ちに解消しました(図2-4)。 一方で、浸透ポテンシャルは処理開始から25日後に有意に低下し、降雨後に徐々に上昇しました。



結果から体積弾性率(ε)の水ストレスに対する応答について次のように考えました。 成熟葉が急な水ストレスを受けたときには、εは速やかに低下して葉細胞の膨圧維持に貢献します。 一方、水ストレス条件下で葉が展開すると、その葉の細胞は大きなεを示す傾向があるようです。 つまり、水ストレスに対するεの応答について、二つの要因 (A)葉の成熟の程度と(B)葉が受ける水ストレスの強さや期間を考慮して場合わけをしたのです。 εの大小どちらが適応的なのかについてはまだわかりませんが、 この研究は今後の発展につながる仮説を提示しました。

水ストレスに対する応答はひとまず明らかにできたものの、 εが葉のどのような性質と結びついているのかわかりませんでした。 そこで、次の研究ではεとの関係が疑われていた葉の細胞壁の物理的性質を詳しく調べました。

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体積弾性率と葉の細胞壁の物性
細胞壁の物理的性質は、外からの力による変形の後、 元に戻る成分(弾性的性質)と戻らない成分(粘性的性質)に分けることができます。 葉の体積弾性率(ε)は昔から細胞壁の弾性的性質を反映すると考えられてきました(Cheung et al. 1976)。 この考えはもし葉が一つの細胞からできているすれば、εの式(ε = V(dP/dV))をもとにしてすぐに想像することができます。

たとえば、ここに同じ大きさのサッカーボールと風船があるとしましょう。 中の空気を抜くとサッカーボールの大きさはそれほど変わりませんが、風船は小さくしぼんでしまいます。 このとき、体積の変化に対する内部の圧力の変化はサッカーボールでより大きくなります。 よって、体積の変化量あたりの内部の圧力の変化量からゴムの強さを知ることができます。 同じような推定を一つの細胞についてならば適用できるでしょう(Vinters et al. 1976)。

しかし、知りたいのは一つの葉全体におけるεです。 よく考えると葉のεと細胞壁の弾性的性質とのつながりは単純ではないことがわかります。 このように一枚の葉におけるεは、葉が非常に多くの細胞(およそ1億個)からできていることの影響を受ける可能性があります。 そこで、この研究ではεといくつかの葉の性質との関係を求め、 εが本当に細胞壁の弾性的性質と結びついているのか検証することにしました。

この実験ではなるべく硬さの異なる葉について比較することが有効です。 そこで、材料には野外で生育する常緑樹アラカシと落葉樹コナラを選びました。 両種ともコナラ属ですが、アラカシの葉はコナラの葉より見かけ上明らかに硬いです。 また、葉の発生過程の研究していた宮澤さんと矢野さんに習って、 葉の成熟する過程における硬さの変化も追跡しました。

その結果、εは葉の成熟に伴って約5 MPaから約20 MPaに増大し安定しました。 値や変化のパターンに種間差はありませんでした。 このεの変化と深く関連する生理的性質を調べました。 細胞外水割合や葉肉細胞の大きさについては、葉の成熟に伴う変化は大きくありませんでした。 LMA(葉重量/葉面積)は葉の成熟にともなって増大しましたが、大きな種間差がありました。 よって、細胞外の水分や細胞の大きさ、葉の見かけの硬さなどはεとあまり関係していないようでした。 しかし、葉の密度は成熟とともに増大し、種間差も大きくありませんでした。 よって、εは細胞壁の硬さとの関係しているのだろうという推測はできましたが、それ以上のことはよくわかりませんでした。

そこで、寺島先生の意見をもとに葉の細胞壁の物性を詳しく定量することにしました。 大阪市大の保尊先生の研究室で、引っ張り試験機を利用して葉の切片の細胞壁のヤング率を求めました。 細胞壁の生理学的な研究手法は若林先生と曽我先生に習いました。 その結果、εはヤング率と有意な直線関係があり、種間で傾きおよび切片に有意差はありませんでした。 したがって、個葉のεは細胞壁の弾性的性質と密接に関係していることが明らかになりました。 この結果はεと細胞壁の弾性的性質との関係をはじめて立証したものです。

補足として、一つの球状の細胞において、εの理論値(εstretch)を求めました。

εstretch = 2Et / 3r (1-ν)

ただし、細胞の直径(r)、細胞壁の厚さ(t)、ヤング率(E)、ポワソン比(ν)です。 Tyree & Jarvis (1982)の式を材料力学にもとづき改良しました。 その結果、理論値(εstretch)は実測値(葉のε)より大きく、とくにアラカシでは約2倍も大きい結果になりました。 やはり一枚の葉のεは、構成する細胞一つのεとはふるまいが異なるようです。

この研究でアラカシの若い葉の変化を追っているうちに、 同じ枝にある古い葉の水ポテンシャルがいつも高いことに気がつきました。 この思いがけないヒントを掘り下げたのが次の研究です。

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常緑樹の古い葉の水分生理的なふるまい
常緑樹の枝では春先になると、前の年に出た枝と葉の上に新しいシュートが伸び葉が展開します。 もちろん新しいシュートにも水分が供給されていて細胞の膨張や蒸散に利用されます。 これはごく当たり前のことですが、じつは謎がたくさんあるのです。

まず、展開している途中の若い葉は成熟した葉と比べるとしおれやすく、 葉の水ポテンシャル(Ψleaf)がわずかに低下すると細胞は膨圧を失ってしまいます。 これは昔から知られていたことです(Tyree et al. 1978)。 その一方で、植物体内の水輸送は凝集力−張力(Cohesion-Tension)仮説という概念でよく説明され(Dixon and Joly 1894)、 植物体内での水分移動は水ポテンシャルの勾配に従うという原則があります。 この考えによれば、安定して蒸散している定常状態では、枝先のΨleafが植物体内のどの部分の水ポテンシャルよりも低いはずです。 しかしよく考えると、この二つの原則が同時に成立することは難しいことに気がつきます。

たとえば、もしも葉が展開しているときに、 枝先にある若い葉のΨleafが成熟葉と同じ程度まで下がると、若い葉は膨圧を保てずしおれてしまいます。 よって、葉の展開中は植物体内に大きな水ポテンシャル勾配が形成されにくく、水分移動が不安定になる可能性があります。 また、とくに常緑樹ではその枝の構造から、根から運ばれてきた水分は成熟した古い葉より先にある若い葉に届けられなくてはいけません。 成熟葉のしおれ点は低いので、もしも成熟葉がいつものように活発に光合成をして吸水力が大きくなると(Ψleafが大きく低下すると) 水分は枝先の若い葉にたどり着く前に途中の古い葉に奪われてしまったり、 あるいは枝先から古い葉へ逆流する可能性もあります。

したがって、枝先の若い葉に水分が届けられるためには古い葉の吸水力の抑制、 すなわちΨleafの調節があるのではないかと考えられます。 この仮説を検証するために、常緑樹の葉の展開途中にシュート内において、水ポテンシャルの勾配が形成されるしくみを調べました。

大阪

材料には大阪大学の豊中キャンパスに生育するアラカシを用いました。アラカシはコナラ属の温帯性常緑樹です。 同じシュート上に位置する展開葉と一年葉について測定を行いました。 その結果、日中の葉の水ポテンシャル(Ψleaf)は展開葉で高いのですが(-0.6 MPa)、一年葉でもほぼ同じ(-0.5 MPa)でした。 一方で、しおれるときの葉の水ポテンシャル(Ψtlp)は展開葉(-1 MPa)と比べて、一年葉はとても低い(-2 MPa)ことがわかりました。 つまり、一年葉では膨圧(およそΨleafとΨtlpの差)が十分大きいにも関わらず、日中のΨleafはとても高く保たれていることになります。 よって、この一年葉の高いΨleafが、枝先の展開葉への水分輸送に役立っているのかも知れません。

インドネシア

さらに、この研究では北大の甲山先生のご協力でインドネシアボゴール植物園に植栽されているアラカシも利用することができました。 ボゴール植物園ではTreub研究所長のNaiolaさんにお世話になり、またSugiriさんとBudianjoさんに手伝っていただきました。 温帯の日本では気温の低い春先に葉が展開するので、空気の乾燥の影響は小さいと考えられます。 しかし、熱帯では葉の展開途中も高温により空気が乾燥しているので、 成熟葉のΨleafが低下して若い葉への水分輸送が妨げられる可能性があります。 そこで、大阪で得た結果を検証したところ、 やはり成熟葉では日中のΨleafは高く保たれていることがわかりました。 また、Ψtlpが十分に低いという結果も同様でした。 さらに、成熟葉の気孔コンダクタンス(gs)を測定したところ十分に大きい種もあり、 必ずしも気孔の閉鎖によってΨleafが高く保たれているのではないこともわかりました。

若い葉が古い葉を調節しているのか?

大阪でもボゴールでも、若い葉では展開が終わり成熟するに伴って、日中のΨleafは徐々に低下しました。 それにつられるように、一年葉の日中のΨleafも徐々に低下する傾向がありました。 そこで、展開途中の葉あるいはシュートが成熟葉のΨleafを調節しているのではないかと考えました。 もし、展開葉によって成熟葉のΨleafが高く保たれているとすれば、 展開葉がなくなれば成熟葉のΨleafが下がるはずです。 そこで、再び大阪のアラカシを用いて、葉が展開する直前に芽を切除し、一ヵ月後の成熟葉のΨleafを観察しました。

その結果、成熟葉のΨleafはやはり高いままでした。 よって、成熟葉のΨleafは新しい葉が展開する時期には若い葉の存在とは関係なく高いことがわかりました。 おそらく成熟葉の高いΨleafは葉の老化によるものでしょう。 一方で、展開後の成熟葉のΨleafの低下は若い葉につられたものと考えられ、 この場合には成熟葉に対する展開葉の影響があるのでしょう。 この点はさらに検証する必要があります。

まとめると、展開葉はしおれやすくΨleafは高いのですが、 前年葉のΨleafが下がらないのでシュート内での水ポテンシャルの勾配は保たれ、水分が展開葉に供給されます。 一年葉での高いΨleafは、当年枝による気孔制御の結果ではなく、葉の加齢によると考えられます。 この研究は展開途中の葉の膨圧維持について、個葉を単位とするだけでなくシュートを単位として検討する視点を提供しました。 さらに、ごく基本的な手法を用いて、植物にひろくに当てはまる問題を提起しました。 その意味でとても気に入っている研究です。

現在は北海道に生育するミズナラを用いて、体積弾性率と細胞壁弾性との関係を検証しています。 また、西オーストラリアで塩害のある場所に生育するユーカリ植林木の葉の水分特性を調べています。

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論文業績と学会発表、リンクなど


発表論文

Saito T., Naiola B.P. & Terashima I. (2007) Conservative decrease in water potential in existing leaves during new leaf expansion in temperate and tropical evergreen Quercus species. Annals of Botany. 100. 1229-1238.
http://aob.oxfordjournals.org/cgi/content/abstract/100/6/1229

Saito T., Soga K., Hoson T. & Terashima I. (2006) The bulk elastic modulus and the reversible properties of cell walls in developing Quercus leaves. Plant & Cell Physiology. 47(6). 715-725.
http://pcp.oxfordjournals.org/cgi/content/abstract/47/6/715

Saito T. & Terashima I. (2004) Reversible decrease in the bulk elastic modulus of mature leaves of deciduous Quercus leaves subjected to different drought treatments. Plant, Cell & Environment. 27. 863-875.
http://www.blackwell-synergy.com/doi/abs/10.1111/j.1365-3040.2004.01192.x

Saito T., Tanaka T., Tanabe H., Matsumoto Y. & Morikawa Y. (2003) Variations in transpiration rate and leaf cell turgor maintenance in saplings of deciduous broad-leaved tree species common in cool temperate forests in Japan. Tree Physiology 23: 59-66.
http://heronpublishing.com/tree/summaries/volume23/a23-59.html

学会発表

  1. 齋藤隆実、曽根恒星、栗本耕平、林和典、野口航、寺島一郎「西オーストラリアの塩害地に植林されたユーカリ乾燥耐性系統の葉の水分特性」第71回日本植物学会大会、P-141、野田、2007年9月、ポスター発表。
  2. 齋藤隆実、曽我康一、保尊隆享、寺島一郎「樹木の葉の成熟過程における体積弾性率の変化」第70回日本植物学会大会、3aF02、熊本、2006年9月、口頭発表。
  3. 齋藤隆実、Paul B. Naiola、寺島一郎「熱帯性および温帯性常緑樹の当年葉の展開時におけるシュート内での水分配」第52回日本生態学会大会、P2-093、大阪、2005年3月、ポスター発表。
  4. 齋藤隆実、寺島一郎「広葉樹の葉における細胞壁の力学的性質の発達」第51回日本生態学会大会、P1-001、釧路、2004年8月、ポスター発表。
  5. 齋藤隆実「樹木の葉の成熟過程における水分特性の変化」第63回日本植物生理学会京阪神地区談話会、大阪、2004年3月、口頭発表。
  6. 齋藤隆実、寺島一郎「樹木の葉の成熟過程における水分特性の変化2」第67回日本植物学会大会、1pI01、札幌、2003年9月、口頭発表。
  7. 齋藤隆実、寺島一郎「水分ストレスによる樹木葉の体積弾性率の可逆的低下」第50回日本生態学会大会、PA2-069、筑波、2003年3月、ポスター発表。
  8. 齋藤隆実、寺島一郎「樹木の葉の成熟過程における水分特性の変化」第66回日本植物学会大会、2aH05、京都、2002年9月、口頭発表。
  9. 齋藤隆実、寺島一郎「葉の水分生理特性を示す体積弾性率と細胞壁の諸特性との関係」第49回日本生態学会大会、F115、仙台、2002年3月、口頭発表。
  10. 齋藤隆実「乾燥環境下の樹木葉において水分生理に基づく諸数値の変化が持つ意味」第65回日本植物学会大会、1aF04、東京、2001年9月、口頭発表。
  11. 齋藤隆実「冷温帯落葉広葉樹のガス交換、水分、および光合成の特性」日本生態学会関東地区会生態学関係修士論文発表会、東京、2000年3月、口頭発表。
  12. 齋藤隆実、田中格、中野隆志、田邊裕美、奥田史郎、松本陽介「落葉広葉樹8樹種の水分生理特性」第110回日本林学会大会、松山、1999年4月、口頭発表。
リンク
植物生態学研究室

宮沢 良行さん(九州大学)



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Last updated: 26th November 2007
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